细菌蛋白提取试剂盒（免超声）
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| 商品名称 | 细菌蛋白提取试剂盒（免超声） |
|---|---|
| 品牌 | 贝博生物 |
| 货号 | BB-31232 |
| 保存温度 | 2-8℃ |
| 注意事项 | 1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.试剂拆封后请尽快使用完！ |
| 有效期 | 一年 |
| 检测方法 | WB,IP等 |
| 适用样本 | 细菌 |
| 产品特点 | 1.使用方便：不需昂贵设备。 2.可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。 3.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。 4.采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。 5.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。 6.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。 7.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。 8.本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。 |
| 产品应用 | WB,IP等 |
| 仪器准备 | 1.离心机 2.振荡器 3..涡旋混匀器 4.移液器 5..冰箱 6.冰盒 |
| 试剂准备 | 1.PBS缓冲液 2.蛋白定量试剂盒 |
| 耗材准备 | 1.离心管 2.吸头 3.一次性手套 |
| 使用注意事项 | 1.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。 2.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。 3.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 4.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。 5.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。 6.本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。 |
| 使用方法 | 1. 提取液的准备： 根据所需要提取的样本量，每500 μl裂解液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物和5 μl蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。 2. 在4℃， 10000×g条件下将菌液离心5 min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。 3. 用PBS洗菌体一次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。 4. 按每50-100 mg湿重菌体样本加入250-500 μl提取液，吹打混匀，2-8℃振荡45-60分钟。 5. 在4℃， 12000×g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入冷的干净离心管。 6. 即得到细菌总蛋白样品。 7. 将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。 |
| 常见问题分析 | 1.蛋白浓度低？ 处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。有些革兰氏阳性菌可能较难裂解，有条件的话最好进行超声处理。 2.用什么方法定量蛋白？ 建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。 3.提取时出现胶状沉淀？ 蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。 4.提取的蛋白具有活性吗？ 本试剂盒含有破坏蛋白天然结构的组份，有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白无法保持其天然构象和活性。需要活性蛋白的可以选择贝博其它货号的试剂盒产品。 |
| 参考文献 | 1.HaiFeng Su et al. An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355） 2.HF Su et al. A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool Fuel 2020 （IF=5.128） 3.H Shi et al. Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698） |
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